在荧光染料的选择中,要根据某一选定荧光染料的性能参数进行选择,从而判断是否合适。荧光染料要根据哪些参数来进行选择呢?
初始亮度:是指示荧光染料的相对亮度,该值由摩尔消光系数和量子产率得出,这两个参数对于每一单个荧光染料来说都是特异性的。具有较高初始亮度的荧光染料适用于检测较低丰度的靶标。
缓冲液中的光稳定性:是初始荧光强度在经过30秒连续照明后残留比率的相对百分比,该值在使用40x/1.4NA的物镜和100w汞-弧光灯作为光源的条件下,通过观察置于磷酸盐缓冲液中的样本获得。缓冲体系中光稳定性较高的染料将更适合于活细胞成像和检测等相关应用。
抗淬灭剂中的光稳定性:是初始荧光强度在经历30秒连续照明后残留强度的相对百分比,该值在使用40x/1.4NA的物镜和100w汞-弧光灯作为光源的条件下,通过观察ProLong® Gold 或 SlowFade® Gold抗淬灭剂中的样本获得。抗淬灭试剂中光稳定性较高的染料更适合于固定细胞样本的成像和检测实验。
染色指数:是一个归一化数值,可用于比较不同荧光染料在流式细胞术应用中荧光亮度的差异;该值通过使用阳性区域的平均荧光强度(MFI)减去阴性区域的平均荧光强度得到的差值,再除以两倍的阴性区域标准差获得。
激光束:表示流式细胞检测中常用的激光束
通用检测通道:表示能够生成最佳成像结果的标准显微镜滤光片设置
最大激发波长:表示获得峰值的激发波长
最大发射波长:表示获得峰值的发射波长